DOI: 10.1051/rnd:2001129

Reprod. Nutr. Dev. 41 (2001) 267-272

Birth of piglets after OPS vitrification and transfer of compacted morula stage embryos with intact zona pellucida

Françoise Berthelot, Françoise Martinat-Botté, Christine Perreau and Michel Terqui

Physiologie de la Reproduction et des Comportements, UMR 6073 INRA-CNRS-Université F. Rabelais, 37380 Nouzilly, France

(Received 27 February 2001; accepted 25 April 2001)

Abstract
In swine, five to six days post-insemination, morulae and blastocysts are collected together after uterine flushing. The purpose of this study was to vitrify zona pellucida-intact morulae with Open Pulled Straw (OPS) technology and obtain piglets after transfer. Morulae (200) were vitrified after a two-step equilibration in ethylene glycol, dimethyl sulfoxide and sucrose in Hepes-buffered TCM199 + 20% NBCS medium (TCM). 2-6 morulae were loaded into OPS and plunged into liquid nitrogen. At embryo warming, a three-step dilution with decreasing concentrations of sucrose was applied. In each of 10 recipients, 20 morulae were transferred surgically. Day 25, gestation rate and the farrowing rate were 80% and 70% , respectively. The pregnant recipients farrowed from 1 to 8 piglets and the survival of total transferred embryos was 13% . Although survival rates are still compromised, OPS technology is therefore appropriate to cryopreserve porcine morulae with intact zona pellucida.

Résumé
Naissance de porcelets après transfert de morulae dans la zone pellucide intacte et vitrification par la méthode OPS. Chez la truie, 5 à 6 jours après l'insémination, il est récolté des embryons aux stades morula et blastocyste associés. Le but de ce travail est de transférer des morulae vitrifiées et d'obtenir des porcelets. Des morulae (200) sont vitrifiées par la méthode OPS après 2 étapes d'équilibration dans un mélange égal d'éthylène glycol, de DMSO et de sucrose dilués dans du TCM199 Hépès + 20 % de sérum de veau nouveau-né (TCM). Pour le réchauffement, les paillettes sont sorties de l'azote et plongées immédiatement dans du TCM + sucrose, l'élimination des cryoprotecteurs se faisant en 3 étapes. Pour évaluer la viabilité des morulae vitrifiées/réchauffées, 10 receveuses reçoivent chacune 20 morulae après transfert chirurgical. Le pourcentage de mises-bas est de 70 % , celui des porcelets nés par rapport au nombre d'embryons transférés est de 13 % . Cette technique qui doit être améliorée, permet de vitrifier des morulae et d'obtenir des porcelets après transfert.

Key words: pig / embryo / morula / OPS vitrification / cryopreservation

Mots clés : porcin / embryon / morula / OPS vitrification / cryoconservation

Correspondence and reprints: Françoise Berthelot berthelo@tours.inra.fr

© INRA, EDP Sciences 2001